产品内容：
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1支，4℃避光保存。临用前加1mL蒸馏水充分溶解。
试剂二：液体50mL×1瓶，4℃保存。
 
产品说明：
胰蛋白酶选择性水解变性蛋白质中由赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，是一种重要的消化酶。此外，胰蛋白酶还广泛应用于脓胸、血胸、外科炎症、溃疡、创伤性损伤等所产生的局部水肿、血肿及脓肿等的辅助治疗。
胰蛋白酶催化水解BAEE的酯键，生成BA，BA在253nm处有吸收峰，通过测定253nm 吸光度增加速率，即可计算出胰蛋白酶的活性。
试验所需自备仪器和样品：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
称约0.1g组织，加入1mL提取液，冰上充分研磨，10000rpm 4℃离心10min，取上清，即粗酶液，置冰上待测。或直接称取0.1g酶制品，加入1mL提取液，置冰上待测。
二、测定：
1. 分光光度计预热30 min以上，调节波长到253 nm，蒸馏水调零。
2. 工作液的配制：将试剂一与试剂二按 2:97配置工作液，按需配制，并置于37℃水浴预热30min以上。
3. 空白管：取1mL石英比色皿，加入990μL工作液，再加入10μL蒸馏水，混匀，迅速于253nm测定0s和60s的吸光度，记为△A空白。
4. 测定管：取1mL石英比色皿，加入990μL工作液，再加入10μL粗酶液，混匀，迅速于253nm测定0s和60s的吸光度，记为△A测定。
三、胰蛋白酶活性计算：
1.按蛋白浓度计算：
活性单位（U）定义：在1mL体系下，37℃每毫克蛋白质每分钟催化253nm处吸光值增加0.001为一个单位。
胰蛋白酶（U/mg prot）= (△A测定-△A空白) ÷0.001÷（Cpr×V1）÷T
=100000×(△A测定-△A空白) ÷Cpr
2.按样本鲜重计算：
活性单位（U）定义：在1mL体系下，37℃每克组织每分钟催化253nm处吸光值增加0.001为一个单位。
胰蛋白酶（U/mg prot）= (△A测定-△A空白) ÷0.001÷（W×V1÷V2）÷T
=100000×(△A测定-△A空白) ÷W
Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；W：组织质量（g）；V1：加入反应体系中粗酶液体积（mL），10μL=0.01 mL；V2：粗酶液总体积（mL），1 mL；T：反应时间（min），1min。
注意事项：
实验前用1～2个样做预实验，保证吸光值变化在0.01～0. 15之间。
相关文献：
《Long noncoding RNA ENST00000413528 sponges microRNA‐593‐5p to modulate human glioma growth via polo‐like kinase 1》 作者:Ren Zhang，Ruo‐Lun Wei，Wei Du，Li‐Wei Zhang，Tao Du，Ya‐Dong Geng，Xin‐ting Wei 期刊:CNS Neuroscience & Therapeutics 影响因子:4.458 PMID:30924320