人血管内皮细胞生长因子（VEGF）ELISA 试剂盒
英文名称：Human Vascular Endothelial cell Growth Factor,VEGF ELISA kit
保存温度：2-8℃，避光保存
产品规格：96T/48T
有效期： 6个月
人血管内皮细胞生长因子（VEGF）ELISA 试剂盒

操作流程
1. 加入10 μL 校准品、质控品、待测样品到反应板孔内；
2. 加入100 μL酶标抗体工作液到反应板孔内；
3. 室温摇床温育120 min；
4. 洗板6次；
5. 加入1X底物工作液100 μL；
6. 室温温育15 min；
7. 加入100 μL终止液，摇匀约5 s；
8. 用波长325 nm/420 nm的激发/发射光检测
人血管内皮细胞生长因子（VEGF）ELISA 试剂盒
ELISA 试验时，注意事项如下：
1.　正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。
     有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2.　在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:
（1）　固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。
     其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：
     用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。
（2）包被抗体（或抗原）的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。
   吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定：
   即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg／ml等）进行包被后,在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。
   选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg／ml。
（3）　酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记抗体部份）。
    然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度）
    在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
（4）　酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。
   有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，
    应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入.

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