增强型细胞贴壁试剂使用说明书 产品简介：
尽管各种细胞培养耗材都经过一定程度的处理，能够支持绝大部分贴壁细胞的培养，但有一些细胞需贴壁培养但又较难贴壁，需经过贴壁处理方能实现贴壁培养如鸡肝癌细胞系LMH等；还有一些细胞如293T等本身贴壁丌紧造成后续试验过程如转染和/或病毒感染等由于培养时间较长造成细胞容易脱落。这些问题一直困扰着从事相关研究的广大科研工作者。本试剂经过多种配方反复试验优化，采用细胞培养级别的无机盐类，多种合成的高纯度小分子蛋白以及多种保护剂等十几种成分配制而成，具有操作简单，处理后细胞贴壁紧，丌易脱落以及对细胞无毒等优点。
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备注：

替代常用方法推荐：Fibronectin包被、明胶铺板、 细胞培养器材 、组织工程、 Transwell侵袭实验（促贴壁部分，营养部分不包含） 、用FN包被培养板、 Matrigel的包被（促贴壁部分，营养部分不包含） 、多聚赖氨酸包被培养板、 胶原I型蛋白预包被培养板 培养板的包被 、 人纤连蛋白包被培养板、 用293T细胞包被talen慢病毒、 细胞培养材料等用户一起完成相关实验难题。
不建议用的用户：
国产试剂耗材培养的细胞，细胞来源不明的我们暂时不建议用，因血清质量引起的细胞不贴壁不适合我们产品

增强型细胞贴壁试剂与其他的试剂如明胶，Fibronectin，多聚赖氨酸等有何不同
明胶，多聚赖氨酸与这俩试剂不同是我们产品操作简单，毒性很小。已有几株细胞已做实验，完全颠覆ATCC明胶方案

Fibronectin好用的价格非常高，我们优势很大。
微载体的包被，实验已做，又需要图片的可邮件来信

解决LMH细胞大规模培养过程中细胞难贴壁，增值慢，易聚团等问题，利用独特贴壁试剂，配合优化培养方法，使细胞3-5小时可贴壁生长，36-48小时可传代培养，细胞贴壁培养维持时间长，长满后可维持7天，仍保持良好细胞形态。4型腺病毒增殖滴度高，TCID50可达8.0以上。疫苗免疫效果确切，免疫组100%保护，对照组攻毒后全部死亡，剖检后出现典型心包积液-肝炎综合症症状。

LMH细胞完成60-70代细胞培养，细胞复苏生长无任何衰减变化。其他试剂相关性及无血清的相关性，好的培养试剂选择，使细胞无退化达到百分之百传代，无血清暂时不能替代有血清方案，建议各种无血清方案细胞用有血清方案保种，例如：cho sf9 sf21 等。
2018细胞验证：lncap（成瘤实验已完成，文章已发,A172,293T共聚焦实验,jurkat转染前贴壁驯化。LMH细胞150代以上无变化，后续实验无影响）
2019细胞验证：LMH细胞传喉实验TCID50六点零以上，神经类细胞系，干细胞贴壁生长。悬浮细胞转染驯化成贴壁细胞实验中。
案例：LNCAP细胞培养优势很大，替代国外包被培养板完全可以。工业应用案例见附件，国外期刊六月份可查询并引用
文章标注，
BeiJing XiGong biological technology co., LTD
Enhanced cell adhesion kit-3(ECAK-3)
CAT:C028

后续售后服务跟踪及产品销售服务完整，欢迎位老师来信沟通实验细节。

20200915更新说明： Transwell侵袭实验\Matrigel的包被（促贴壁部分，营养部分不包含）
经两年时间产品推出后与用户使用情况统计与总结：1ml的试剂可稀释到10ml-50ml方案都有很好的效果。推荐我司原装进口PBS稀释。后续用户提出稀释要求的，我们可配齐所用这个进口的PBS即用型试剂。
案例细胞图片（产品资料）两个293案例细胞腺病毒感染后滴度相差十倍以上。
细胞工厂应用用户可讨论培养中细节部分，我们常年统计使用中常见问题。

20200919更新统计应用补充：案例几株细胞经几年培养统计应用后总结，细胞复苏步骤该试剂有促进细胞着床后，有利于细胞增殖生长。陆续会用案例细胞列出。
促贴壁后，单克隆，荧光细胞筛选也有促进作用。

20201110更新统计应用补充:复苏细胞时着床时间更快，准备应用几株有名难养细胞，BEAS2B，INS-1，HK-2，THLE-3等原代， 都有着床不牢特性。ATCC来源，细胞生长不顺利关键时间段，可分出少量细胞测试。类似案例细胞，来信询问。成功救助用户基因敲除鼠来源MEF珍贵株。

20201120更新统计应用补充:北京通过赠送好质量293FT，HELA两株，统计实验室培养习惯对细胞影响，试剂部分不说了，技术部分，不充分理解消化细胞胰酶化学作用，避免机械力对细胞损伤，就是试剂较好，吹打细胞后，细胞破碎后，存活剩下都是个头较小的细胞，这些习惯养下来的细胞，后续转染，病毒包装，感染等实验结果逐年下降。且很多实验室后续实验都有较的固定步骤，影响最终实验效果，欢迎与各位新手，讨论，传代后消化等细节步骤，邮箱或加我微信，注明：消化步骤讨论。

20201201更新统计应用补充:耐药株筛选中应用，避免细胞加药后漂，节省了时间，增加IC50可行行（加药前细胞状态调整很重要，欢迎讨论，告知详情后，胰酶与促贴壁可送试用）
简单阐述：药浓度，大剂量浓度，最低浓度，梯度拉出，中间任意浓度组，加药三遍筛选，传代后能存活细胞肯定是耐药株。如需单克隆，等细胞集落后，加琼脂固定细胞后，打孔器打出目的细胞。

20201210 救助珍贵基因编辑鼠来源MEF一株

20210104 免疫荧光应用，细胞舒展度好，细胞组成器件清晰，细胞经得住折腾，成像设备较新的实验室欢迎使用，

20210630
细胞促锚着应用：耐药株筛选、反复加药、冻存复苏。救助细胞、共聚焦、293系列特性，SV40转染半悬浮半贴壁特性或较难养细胞，原代上皮筛选后替代胶原、神经类原代类细胞系类替代黏连蛋白、蛋白高产含血清细胞工厂方案已有工业应用。
案例：293促贴壁与不加，低浓度胰酶消化时间相差20分钟。可根据稀释不同浓度梯度，筛选出实验目的要求贴壁力度。低浓度长期促贴壁使用后，细胞趋势向好，进口试剂耗材
长期传代后有做细胞核型分析用户来信告知，免疫悬浮或做凋亡用户有这方面试验要求可讨论，反向细胞驯化我们已有些理论，案例还不是很多。正规细胞库老师要有时间测试，产品全部免费测试，无数量限制。

20211013:免疫细胞、原代细胞转染逆转录病毒，在我们促贴壁试剂新的应用开发，效果上有明显技术上有突破，POTOCOL还在优化中,关键问题点可讨论

20210910：耐药筛选重点，带药传，应用耐药株类筛选同理，简单易行，开始承接293稳定株克隆筛选试运营，时间短（14天完成G418筛选800ug/ml图一是单克隆生长扩增）
我们优势应该在冻存后复苏细胞锚着，促贴壁优势更大，转染试剂功劳也不小，图四是转染效率很高后，G418加药后活死细胞呈现。
技术讨论详细资料要先告知，各个细节。
原代上皮建系是最后目的。备注：G418浓度根据自己细胞状态筛出。

筛选抗生素
G418, Geneticin Zeocin 嘌呤霉素 Blasticidin Hygromycin B
上述尽量用大厂家的，其他牌子建议关注以下这几个参数（与大厂家比较下，避免条件不一影响后续实验）
Purity (HPLC)
Potency claimed (µg/mg)声称效价（微克/毫克）
Potency upon retest (µg/mg)重新测试后的效力（微克/毫克
ED50 Assay (µg/ml)ED50测定（微克/毫升）

转染前状态调整
90%的细胞——使用台盼蓝染色可轻松测定细胞活性。
转然前我们推荐Optimized Trypsin优势不是一般的大
在无DNA/RNA酶的水或TE中稀释DNA。
浓缩DNA
建议细胞铺成2种不同的密度，以确保较高的转染效率
DNA最早可以提前2小时制备，但不要太早，转染当天，将细胞铺板，转染时，细胞密度保持在汇合率为70–90%
等体积稀释的转染试剂和DNA溶液等体积混在一起后，通过缓慢地上下吹打来混合溶液，也可轻弹试管底部，或者快速涡旋混合
将复合物滴加到培养基上，然后轻轻地晃动板子。 切勿剧烈地将孔中的脂质体/DNA复合物分散，否则会使细胞移位。利用含GFP或LacZ之类报告基因的质粒作为阳性对照，评估转染效率。

293T与FT有抗性，不适合上述筛选，293适合

20211101：也欢迎与生物类产品生产有GMP资质北京附近公司洽谈合作，目前应用案例有中试生产相关蛋白用户（在冻干保护剂遇到瓶颈，也欢迎与国内冻干保护剂研发生产相关相关合作提携-相关研究技术老师欢迎加盟-国外这个技术相当成熟-我们上游工艺已经有不错的成绩,蛋白生产出来只能负二十保存，挺尴尬的）

20221013：救助G418筛选HUH7株，复苏后细胞不锚着，该试剂上后救助成功，该类耐药株救助分析，加药后细胞损伤大，与常规生长差别很大（加药后易成片，成团-也因详细统计过这类细胞特性，上皮，上皮样类，胶质类生长特性，都有这类特性，统计方法是冻存前解决这类生长特性，复苏后细胞成活率很说明问题，后续该类解决方法在转染前优化细胞调整也有明显提高转染效率，总之都是解决这类成团成片特性后提升细胞质量有明显改善）建议老师在做耐药株时保种参考，成团成片类细胞：HEPG2，THP-1，RAW264.7,JURKAT,淋巴瘤类，BV2，SV40-大T抗原转染建系，国内目前建系实验室很多，关于建系各方面都可讨论，离体处理，培养（添加因子，促锚着），转染-试剂为主（原代，干细胞，免疫类难转染问题统计），保种等。了解免疫细胞转染感染需细胞，蛋白锚着的可来信讨论。

20221111原代关键词可讨论统计中：
离体保存消化处理：设备+试剂+统计经验讨论
细胞质嗜弱碱性：培养基选定技术、文献、经验等综合考量讨论（无血清成熟株、难养株统计）。
贴壁：胶原、明胶，粘连蛋白、白蛋白、多聚类，Matrigel基质胶、促贴壁试剂等，结合成团成片问题，后期细胞不理想，细工统计后参考与这些产品不同处。及各种实验细工解决思路。
气相流式在原代中筛选后统计开始，常规液相流式筛选后建系目的救助开始统计。

20230318类器官应用效果不错，配合压力，机械力研究细胞相关实验比较有优势，出口案例增多，国外用户价格暂定600元，干冰费用较高，路途较远。为保证品质，运输温度较严格。
20230319 间充质细胞应用，建议种子库评价的，我们可参与提供试用，该类产品建议只与进口品牌品评测比较。各种实验要求可讨论。 建议评测代数来比较，细胞质量突出，是为后面实验提供高质量细胞更优方案。

20230412
增强贴壁试剂处理难转细胞方法参考
（原代免疫类、原代正常类、胶质类、）
促贴壁处理培养板PBS清洗后
1. 逆转录病毒保存液 (-80 ℃) 于37 ℃水浴融解。
2. 将病毒液加入包被后的24孔板，每孔300 μl。
3. 32 ℃放置4小时。
4. 吸出病毒保存液。
5. 每孔加入待转染的细胞悬液400 μl (通常细胞浓度为1 × 105/ml) 。
DNA，RNA转染用户，建议用量配比参考GIBCO-POTOCOL后，在优化。需POTOCOL来信告知。
试用发送中，使用要求，培养体系全部进口（最好是GIBCO体系，细胞可以正常传代成功率高）截止到2023年10月1日，实验满意尽量付款，成本太高了
告知细胞详情（离体后处理我们有相关总结,可讨论细节）
国外用户运输成本较高，价格暂定600元。

20230720: 高滴度科研、生产是我司目前比较成熟了，应用同理细胞案例可行性高，平稳，易重复，核心是最基础的细胞状态与质量，加辅助相关试剂及细胞维持培养结合，我司开始重点案例源头细胞质量评价、技术方法、试剂、全方位配合用户完成目标高滴度需求。
细胞：293FT（对细胞要求高的用户可注明，共享ATCC直接来源该株细胞，血清及促贴壁试剂用户免费共享），技术储备预判，滴度达到常规参数50倍，争取百倍。
培养体系：细工提供全部试剂，备份体系还有THERMO，协和细胞库培养体系。三个厂家方案保种验证目的，也是为工业用户国产体系备份提供相关验证细胞验证参数。
偷偷讨论哈：无血清研发我们优势很大，各种成份细节都可长期验证，争取拿到最牛技术核心。含血清基础技术储备充足。也是我们优势。（上述都是含血清方案）
高滴度案例细胞讨论：原代建系肝各种POTOCOL中难点都可讨论，建议上手鼠、鸡、鸭比较容易可行，

后续进口难养类细胞做些相关经验储备：这节验证后，案例细胞是THLE-2。THLE-3正常肝细胞系。正常系难点问题都可讨论，我们并统计。

国产耗材种子库推荐该产品： 培养耗材TC处理生产商分德系、日系、美系。差别关键点还是有些的，如果有种子库需求实验室，生产工厂对种子库要求严格实验室，建议长期保种评测比较，目前细工统计结果还是有些差别的，种子库理念细工参考国内正规库理念，负责老师都有相关书可参考。这里不做说明，只是对目前存在的细胞不锚着问题提供参考解决思路。有条件实验室建议长期评测与讨论。

另：难养细胞增殖慢说下目前统计结果参考，不对处请指正。难养细胞培养进口试剂耗材为基础，找到难养关键点（细节讨论邮件沟通）肝、乳腺、免疫悬浮、胰岛胰腺类，冻存、复苏。增殖时间过长是培养条件技术手法等细节引起的，经常与支原体，黑点混搅.引起的判断错误，经2023年统计解决几株细胞问题，后面可与老师讨论。

20240410: 噬斑工业应用案例参考： 有时候不是分离不到病毒，是细胞维持培养时间不够，特别是难分离，新的病毒，热点应用等，从零到一是重中之重。细胞维持培养是关键，经五年腺病毒、溶瘤病毒，细胞种子库级别试剂，细胞工厂应用等相关技术储备冗余工业试剂提供商应用特点，我们促贴壁起到关键作用。
案例细胞：LMH,维持培养第十天出现噬斑，用户已完成单克隆保种，有相关需求用户要深入讨论难点，建议试剂耗材，厂家型号，培养特点，目的要求，告知详情，我们们给出参考建议，有国外疫苗生产商用户的商家，我们可送试用及解决方案。也可做第三方验证。细胞工厂含血清方案为基础。

20240424:
细工稳转株构建痛点优势
超剂量筛选稳准株
1：高于正常计量加药 2：带药传代 3：带药复苏
工业优势： 稳转株筛选后，普通培养条件（减少成本），常规实验室（可行性高），无需添加贵重设备，目的蛋白表达14天培养（细胞维持培养状态优势），可完美完成含血清无血清各种需求。实验室高手欢迎参与，我们对接药企联合开发及应用（变现快），各种难点痛点欢迎提问。各种无血清培养基，转染试剂全免。（有国外需求用户，提成高）

20240515
应用案例一，该产品上游开发已成熟，随时能转化生产，
该试剂优势就是维持培养，对细胞无损，延展应用工业疫苗生产（溶瘤蛋白生产泡内产物）、外泌体维持培养、上清物分泌各类需求（脐血脐带上清分泌工程应用）。
工业案例详细参数参考：采用 LMH 细胞生产禽腺病毒疫苗，常规基本都在 107.0/0.1ml 左右，极大地限制了产能。该试剂应用后，4 型禽腺病毒病毒 TCID50 效价大于 108.5/0.1ml（，使 LMH 细胞贴壁时间大为缩短，而且细胞培养 192h 后仍保持较好细胞形态， 易于禽腺病毒病毒的复制与增殖及后续毒价测定。4 型禽腺病毒病毒 TCID50 效价大于 108.5/0.1ml，目前 1ml 全病毒培养液可配制 200 羽份疫苗，可 100%保护 SPF 鸡免受 4 型禽腺病毒强毒的攻击（未免疫组攻毒 72h 后 100%死亡）。该试验结果由不同厂家不同 专业人员多次在细胞工厂上验证完成 。
以上试剂及工艺都成熟了，想咨询下出口要求，该技术水平随时可第三方验证（无替代，国内国外），邮件联系。
应用案例二，附件中案例图片
噬斑工业应用案例参考： 有时候不是分离不到病毒，是细胞维持培养时间不够，特别是难分离，新的病毒，热点应用等，从零到一是重中之重。细胞维持培养是关键，经五年腺病毒、溶瘤病毒，细胞种子库级别试剂，细胞工厂应用等相关技术储备冗余工业试剂提供商应用特点，我们促贴壁起到关键作用。
案例细胞：LMH,维持培养第十天出现噬斑，用户已完成单克隆保种，有相关需求用户要深入讨论难点，建议试剂耗材，厂家型号，培养特点，目的要求，告知详情，我们们给出参考建议，有国外疫苗生产商用户的商家，我们可送试用及解决方案。也可做第三方验证。细胞工厂含血清方案为基础。附件是十天噬斑图片参考。
涉及要点：胰酶消化，维持培养基应用、促锚着，瓶养控制PH变化等，具体问题具体分析。
应用案例三，
生产用稳转株构建痛点优势
超剂量筛选稳转株 1：高于正常计量加药 2：带药传代 3：带药复苏
工业优势： 稳转株筛选后，普通培养条件（减少成本），常规实验室（可行性高），无需添加贵重设备，目的蛋白表达14天培养（细胞维持培养状态优势），可完美完成含血清无血清各种需求。实验室高手欢迎参与，我们对接药企联合开发及应用（变现快），各种难点痛点欢迎提问。各种无血清，转染试剂全免。
应用案例四，国内溶瘤病毒研发生产基于293细胞已有四年以上平稳订单，五家以上用户。
应用案例五：科研户救助细胞较多，案例不一一列举了，珍贵细胞（复苏后细胞不锚着）其他蛋白互作用，共聚焦，原代替代胶原酶优势，成瘤不稳定组细胞系，外泌体，细胞产物类研究，生产等可发试用，如需深入开发难点痛点上游工艺，建议告知细胞名称，培养量需求，产物名称，纯化目前我们还是弱项，细胞产量，代数，维持培养优势。种子库级别试剂可行性更高，总体看降低成本。是我们最大优势。

种子库建系建库，细工统计内容较多:也欢迎国内培养基，血清厂家参与，周期长，费用高，可成功建系意义大。欢迎外贸出口商给介绍国外用户。
试剂开发相关技术储备痛点统计中：
含血清：建系保证可行性高，体系缓冲能力强，容错率高。
无血清：在含血清细胞充足现状下，开发相对容易很多。无血清细胞系问题分析有积极意义。
黑点：国内建系常见问题，细工可从不同等级培养基，血清，胰酶，冻存后复苏活率。各痛点讨论
生长慢：国内建系常见问题，团聚成片，救助成功后处理等，按细胞组织特点，系常见问题分析并给出参考建议。
成瘤不稳定救助：实验室普遍常见问题，细工给出参考方案，该统计2023年开始，预计效果要理想，优化后，一个25培养瓶接种几只动物难度应该不大，包括PDX成瘤等痛点问题。
（最后救助后，配套消化无损胰酶也很关键。具体细胞具体分析）

20240529
其他应用相关统计参考：
超长时间维持培养，对细胞无损.
细胞生长完全控制（可完全精准控制细胞实验要求长，停，维持），延展应用细胞产物，工业疫苗生产（溶瘤蛋白生产泡内泡外产物）、外泌体维持培养、上清物分泌各类需求（脐血脐带上清分泌工程应用）。
自动化培养技术储备参考，悬浮贴壁驯化（自动化培养中控制细胞生长特性，贴壁悬浮），各种需求不同相关技术统计与储备。
类器官应用参考： 前期建系培养更高可行性痛点讨论，离体后无化学干扰，机器干扰后更可行，前提培养顺利后，单克隆，稳转株建立，涉及要点易重复培养体系可行性，建系目的冻存复苏重要性，及可行性方法讨论。
人造肉：先二维培养，细胞量充足后，在3D培养，实验室不用上发酵罐，细胞工厂简单易行，我们手里已有用户做房子改造成大型培养装置，容量大，成本低，培养体系成本控制的低，简单易行。
疫苗应用：上述几点都是超量培养为前提简单可行，疫苗应用相对简单，维持培养含血清方案细胞缓冲能力更强，目前头部几个原代培养公司，不传代，维持培养一年左右（原代还没建系前，缺点是不能传代）
维持培养（强冗余试剂开发）：单克隆表达 噬斑 蛋白晶体（晶体需高滴度蛋白），病毒晶体 ，重组蛋白，抗体生产，单克隆表达，兽用疫苗应用、蛋白互作用、因子生产
（细胞培养上清回输可能原因有两种参考，一是分泌促生长因子；二是释放竞争性信号，刺激细胞增长，这也是细胞太稀不易生长的原因。）
稳转株建系优势痛点讨论：耐药株\稳转株构建、单克隆表达、噬斑、原代细胞、sv40，tHERT
国产细胞培养体系建系制造要点痛点可讨论：纯国内技术工程细胞株建系（工程株需长时间验证为稳妥，痛点问题提前预判及有积极意义的相关技术储备、强冗余试剂开发、维持培养应用、大型培养箱制造）并行进口体系备份，长期验证细微差别。

20240625
工业案例应用一：禽类共生病毒的分离应用：腺，豆、圆环的单种纯化分离，理论方法，预实验都比较理想，更多案例应用还在技术储备中，与各位老师合作讨论难点痛点，北京实验室可参与课题讨论，就难点痛点问题，我们做些统计先，
蛋白互作用对细胞维持培养要求高用户，可把问题先讨论后，细工给些参考建议。

国内建系实验室，生长时间过长的，也可考虑单克隆或慢培养两种技术方案，难消化细胞建议从源头考虑重新构建，难点都可通过类似问题细工简单解决方案验证，例如：难消化(简易解决培养板普血清），细工方案通过提高组织活性（不纠缠在消化不下来活性不高组织或细胞上）可行性高，操作简单，可通过简单操作步骤验证，后面单克隆，稳转株，冻存复苏等，都是基于可行性稳妥后，难点痛点先行验证可行方案，在运用在建系或珍贵细胞上。

20240702
应用补充案例：
悬浮免疫细胞，贴壁驯化培养，共聚焦、CCK8、自动化培养设备开发、类器官免疫细胞与组织细胞共培养等
国内实验室珍贵株更新：简易(单克隆、去支原体培养与长期验证)，自建系培养优化提升生长速度与细胞质量。
各种组织细胞来源基质胶维持培养开发新工艺合作（适合大量用细胞工厂生产企业、实验室）长期合作：适合腺类、腺神经共存、淋巴瘤类、胶质类，肉瘤类长期合作从建系开始，到完成整个上游工艺开发，普通实验室环境就能完成到中式，无需大型设备与昂贵研发投入，蛋白分析、蛋白纯化国内研发生产商路过留言，我们只能到细胞工厂规模生产这步无BUG，没能力做完整体。有做转化实验室可深入讨论痛点难点。

20240901增强贴壁试剂辅助复苏验证优势：活率及状态都有明显提升，三年以上冻存复苏可做比较验证，活率及细胞舒展通过几天复苏后就可得到明显差别（救助案例多），该点优势在复苏上能有明显效果，后面有条件实验室，在平时培养中也是同理提高细胞增殖及状态，转染后传代死细胞多一种技术储备，也可用同理方法做比较。
注：
1：成片成团冻存前要解决，参考我司优化胰酶特点。
2：高质量血清在冻存复苏中非常关键，也建议有条件组，把平时采购血清前验证作为一个关键指标，其他细胞验证血清都可讨论。
种子库-细工整套冻存复苏试剂备份组
冻存方法推荐：DMSO10%+FBS90%
对冻存复苏要求更高，可用案例细胞用细工推荐程序降温盒+棉花冻存细胞，国内建系推荐有一备份组按上述方法。
细胞培养最终目的-平稳的细胞状态，
常用的细胞三年做冻存复苏验证
难养细胞1-1.5年做冻存复苏验证

20240915

自动化转染应用中，细工冗余试剂开发产品优势-增强贴壁试剂用途
自动化用于许多应用，以减少手动处理引起的变化，并在高通量转染分析中获得可重复的结果。高通量应用，如敲除研究或靶筛查，通常包括细胞转染。细工开发冗余试剂增强贴壁试剂介绍。

锚着不牢，或免疫细胞可用增强贴壁试剂辅助，反向驯化，高通量处理细胞优势明显。
常规自动生成和分析 Matrigel 中的 3D 细胞培养物 可自行搜索相关介绍，细工另走路线，走先建系，在二维大量培养后，充足细胞量后在成球培养（优点是细胞质量统一，维持会培养会更长，稍大球也无防，配套自动化使细胞按所想即所得培养）类器官目前常见的问题内部溃烂问题可增加更长时间维持培养。人造肉，外泌体生产同理。
悬浮通过增强贴壁试剂可驯化成贴壁培养-细工建系目的（不用增强贴壁后，细胞呈悬浮原始样）
难转细胞主流方向，反向转染法，促贴壁后转染效率大大提高。大厂都有该方法介绍，原代，免疫类主流，配合该方法。（该方法让免疫悬浮通过辅助试剂贴壁后，增加转染效率）
平时培养就可比较与加促贴壁试剂后状态，参考冻存复苏救助优势。

20240926

科研生产应用介绍
二倍体工程细胞应用科研，生产，自动化设备+冗余试剂（技术）纯国内技术生产备份。
原代细胞生产用代数限制，大大影响疫苗产量，细工增强贴壁法是及配套，增加细胞维持培养天数，产能相应提高，兽用乙脑疫苗生产提高10倍,研发到中式，可交钥匙对接，无需特殊昂贵设备添加，含血清细胞工厂。
WI- 38、MRC- 5、FRhL- 2 、2BS、KMB17、人二倍体细胞（HDCs）、BHK-21,HEK-293、walvax-2  BV2  A172(后两株是新工艺基质胶开发目的）
二倍体工程细胞应用科研，生产，自动化设备+冗余试剂（技术）纯国内技术生产备份。拓展更多应用完善及问题统计
冗余试剂开发重点：常规问题应该都要解决，包括些难点痛点也要有突破，在上自动化设备，会有超强容错能力，预计自动化软试剂与硬设备对接顺畅，规模培养延展应用，建系等都会很顺利产出高质量细胞，蛋白，蛋白下游研发企业要能共享技术资料公司，给些上游研发加持。

20241009

自动化统一案例细胞欢迎参与，免费提供细胞种子，试剂，要求用户进口耗材配合，同一标准后，对问题解决准确。
如：国产进口两个体系，含血清无血清两个体系，常年培养后碰到的问题积累也不一样，解决思路办法完全不一样，就自动化，统一后，对准问题相对容易。
293，293T
培养基，血清，胰酶，DMSO,PBS
科研型：目的是国内培养体系做种子库备份，技术达标后，我们会陆续添加细胞系，都是正规库来源。例如这个细胞系相关慢病毒，腺病毒感染，建系目的，我司都可讨论高滴度扩增后应用，建系，晶体研究等。
生产型：国内培养体系备份，提供细胞，水试剂，进口耗材要求，案例细胞种子库满意后，适合二倍体生产应用。直接到中式，应用案例五年不间断生产相关统计。
自动化转染，规模培养，相关冗余试剂开发。

国外细胞培养疫苗生产用户拓展合作，细工增强贴壁试剂出口，国内有验证实验室，可发试用。

20241125
国内实验室多，也呈现各种难题，在后面自动化培养冗余试剂开发过程中，类似难题出现，如不能解决，影响后期各种进展，我司正好有这方面技术储备，我们目的是建国内细胞系，难点痛点问题统计会一直统计下去，热点包括，耐药株建立痛点，建系痛点（细胞培养优化）简易单克隆，冻存复苏建系种子库应用，都可搭乘自动化培养中问题，冗余试剂理念提出，适合国内实验室得技术储备一直在做。实战案例最能说明问题，优略验证也快。
自动化培养（微流控制）给厂家提供冗余试剂开发，通过厂家也在联系各地已有设备实验室，让科研人员就近上相关自动化培养设备（目的是，统计更多痛点难点后，建系）开发精准SOP
我们目的是自动化培养建系及工业应用技术储备，痛点问题有方案，长期关注评测及公布阶段结果。
案例:
HUVEC建议用大品牌较新开发产品，遇到瓶颈，我们含血清方案备份（先保证细胞传代顺利），血管形成推荐协和细胞库来源株，（理由可讨论）
耐药株： 通过解决黑点，生长慢，就耐药株列出我司技术储备后的注意事项（大牛老师可补充我们可行性），后面我们会公开自动化培养（微流控制）各地合作实验室，共同开发国内体系精准SOP,我们是建系目的（预实验先行，在上自动化培养)
自动化培养（微流控绘制）需各种问题都要解决与常规验证后.

20241208
我司产品在共聚焦类应用与市面粘连蛋白成品盖玻片不同处
按1：10 ：20：50：100比例稀释后用途，
不同粘度在培养传代弱粘度，终实验强粘度可灵活选择。
解决成团成片，半悬半贴，老幼状态区分，使细胞状态保持一致状态（类器官，人造肉）悬浮驯化成贴壁（单克隆、药筛、种子库优化，自建系优化配合简易单克隆）
耐药株筛选时，灵活选择不同梯度粘度。预实验药梯度建议做百倍，千倍
传代培养弱粘度与强粘度（耐药，共聚焦，力学研究）需求分别用途，
配套自动化培养可有更多粘度选择方案，熟练后可控范围内
冗余试剂理念推出，维持培养在自动化培养高通量：药筛、培养、外泌体，临床样本处理等优势明显。
细胞有强容错超强维持培养并可控在机器与细胞间提供简单易行，可行。也是我司提出含血清方法极力推广方案，无血清方案要结合营养耗尽后缓冲能力差思路解决自动化中容错方案（相关技术统计内容还比较少，经费太高）问题在一直统计各家培养基培养特点。

国产盖玻片建议清洗步骤
盖玻片需用浓硫酸浸泡过夜，第二天用自来水冲洗20遍，置于无水乙醇中6小时，后用三蒸水冲洗3遍，再放在饭盒或玻璃培养皿中烘干，消毒，再烘干后放入超净台备用。 2.准备好的盖玻片或者专业的细胞爬片需要根据细胞的贴壁情况使用增强贴壁试剂。 3.培养板中放置爬片非常有技巧，要将爬片与培养板底部紧密贴合，这样才能避免长成双层细胞。 4.常规免疫荧光操作后，取出爬片。