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困难组织的RNA提取总结 | RNA专题

作者:联川生物技术公司 2017-03-29T09:03 (访问量:4098)


小编有话说

之前给大家讲过绝对不能错过的RNA提取小技巧RNA提取的那些事,小伙伴们的关注度很高,看来大家在RNA提取方面遇到的问题不少啊。今天小编将分享一些关于困难组织的RNA提取小总结,敬请笑纳呦~


1、脂肪含量高

动物:脂肪组织,乳腺,脑,骨髓,包含皮下脂肪的皮肤组织等等)

植物:油料作物的种子:如花生,芝麻等

脂肪含量高的样品RNA提取有一定难度:

脂肪中RNA含量偏低,脂肪与等体积的其他组织相比,细胞数量更少。

脂肪细胞中含有较多的脂肪颗粒,而脂肪颗粒会影响RNA的抽提,特别是用过柱法提RNA时脂肪颗粒很容易将柱子堵住,堵柱会加剧RNA的损失量

注意:对于脂肪组织,需要客户加大送样量,送样量应为常规样本量的3-4倍,通过RNA富集的方式保证下游实验的顺利进行。

2、海洋生物

虾、蟹、贝、海胆、刺参等,蛋白质含量较高,贝、海胆、刺参体内含有成分及其复杂的体腔液,Rnase含量也较高,该类样本抽题比较困难,RNA通常也更易降解

注意:对于该种类型的样本,通常没有固定的抽提方案,只能根据样品本身的结构特点为其选择最佳方案,所以需要向客户交代清楚,这类样本在RNA抽提环节的周期会比其它样本更长。

3、多糖多酚/次生代谢产物含量高

对于多糖多酚/次生代谢产物含量普通的植物样品,一般在提取时加入PlantRNA Isolation Aid试剂,会有一定效果,但是对于多糖多酚/次生代谢产物含量很高的样品比如茶叶、马铃薯、番薯、谷物等,使用天根-DP441试剂盒,效果非常好 。


4RNA含量偏低

植物中木质部纤维素含量较高样本如杉木根、树皮、风干的中草药 ,通常活细胞数量较少;动物中纤维含量较高的样本如肌腱,软骨,心脏,这些组织细胞密度低,单位重量的组织中RNA 含量较低,提取也会比较难,此时需要加大送样量,通过RNA富集最终达到下游实验所需用量 。

5、临床样本

从人组织中提取RNA常常表现出与实验动物提取RNA时不同的困难,实验发现临床类样本RNA的质量通常不好,支原体污染的现象也时常有,该类临床样本准备时应注意防止支原体污染。

临床样本RNA质量差与其组织采集有莫大的关系。通常临床样本的采集过程耗时会比其它样本更久,而样本采集过程为确保RNA具有较高的完整性,要求样本的采集必须新鲜,采集过程速度要快,而大多数临床样本在采集之前可能还去做了活体切片或是器官移植,等正式采集的时候可能尸体已经停放好几天了,这些因素基本确定了总RNA的质量不会太好,临床样本的最佳采集时间是其濒死期即死亡前的组织。


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