细胞凋亡概念及其特征
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细胞凋亡（Apoptosis）：也称细胞程序性死亡（Programmed Cell Death，PCD）， |
细胞凋亡的典型特征： 1）线粒体膜电位的丧失； 2）细胞膜PS（磷脂酰丝氨酸）的外翻； 3）细胞核凝缩和断裂。 |
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凋亡(apoptosis)
程序性死亡，机体为更好地适应生存环境而采取的一种主动死亡过程。
凋亡研究热度分析
细胞凋亡与疾病：
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凋亡不足 |
凋亡过度 |
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肿瘤 |
心血管疾病 |
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自身免疫病 |
血液系统疾病 |
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病毒感染 |
重症肝炎 |
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退行性神经疾病 |
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如老年痴呆症 |
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帕金森症 |
细胞凋亡热点问题：
► 细胞接受胞外信号的刺激启动凋亡
► 胞内凋亡特异性蛋白酶（如Caspase）的活化
► 线粒体对凋亡的调控
► Bcl-2蛋白家族对凋亡的调控
凋亡分期
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早期事件： Ø磷脂酰丝氨酸(PS)外翻
Ø线粒体受损 Ø细胞色素C释放 |
中期事件： ØCaspase 3/7/8/9活化
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晚期事件： ØDN**段化
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凋亡检测 —— Annexin V
关键技术 9项
1，接种 对数生长
细胞密度通常不超过1×106/ml，以免引起凋亡
2，收集 上清消化全收
因部分凋亡细胞可能悬浮于培养基中，须先收集上清，离心收集沉淀，再消化收集贴壁细胞，合并上清和消化下来的细胞。
3，消化 Accutase
避免因消化过度使PS外翻，造成假阳性。
用eBioscience的Accutase酶替代胰酶，在多种细胞系中得到验证，对细胞更温和、长时间消化也没有影响。
（对凋亡不明显的实验强烈推荐）
使用细胞消化液－－实际效果比较
4，阳性质控 联科 Multisciences
没有明显的凋亡，该如何调节补偿以及设门？
联科凋亡试剂盒配备阳性质控液，使补偿调节so easy
5, 方案 4管 单双混合
染色：1, Blank、2, Annexin V、3, PI、4, Annexin V+PI
上机：1, Blank、2, 50%Blank +50%Annexin V、3, 50%Blank +50% PI、4, 50%Blank+50%Annexin V+PI、
5, 50%Blank+25%Annexin V+PI+25%Annexin V
6，电压 足够大
大到快要超出边界。
7，细胞数量 足够多
多到细胞全部收集。
8，补偿 横平竖直
3、4象限横平；2、4象限竖直
9，漂亮图片
黄金分割（三分原则）。
关键技术 9项
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1，接种：对数生长 2，收集 ：上清消化全收 3，消化：Accutase 4，阳性质控：联科 Multisciences 5，方案：单双混合 6，电压：足够大 7，细胞数量：足够多 8，补偿 ：横平竖直 9，漂亮图片 ：黄金分割 |
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