Direct PCR Kit (With Dye) 多样本直接PCR试剂盒(带染料)
一、Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 动物组织直接PCR试剂盒
产品信息
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格(元) |
Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 动物组织直接PCR试剂盒 |
10184ES50 |
50 T |
433.00 |
Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 动物组织直接PCR试剂盒 |
10184ES70 |
200 T |
1453.00 |
产品描述
动物组织直接PCR试剂盒是一款可直接对不同动物组织进行PCR扩增的试剂盒,适应性广、稳定性强、操作简易。
本试剂盒采用独特的裂解缓冲液体系,可以快速的裂解多种动物组织样品并释放出基因组DNA,如昆虫足翅、鼠尾、鼠趾、动物皮肤和内脏等。裂解产物可以用于DNA提取纯化、也可以直接用于PCR反应、也可以在-20℃或以下温度条件下长期保存备用。
本试剂盒中提供的2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye)具有很强的扩增兼容性,不需要额外采用纯化提取试剂去除裂解产物中的各种残骸杂质,能直接以待测样品裂解液为模板,进行高效特异性扩增。该试剂为2倍浓缩PCR反应混合液,包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分,大大简化扩增步骤的操作过程,降低污染几率。
该试剂盒可用于动物基因扩增检测、转基因动物基因型鉴定等。
产品组分
编号 |
组分 |
产品编号/规格 |
储存 |
|
10184ES50(50 T) |
10184ES70(200 T) |
|||
10184-A |
Lysis Buffer |
10 mL |
20 mL × 2 |
室温或4℃ |
10184-B |
Proteases |
400 μL |
-20℃ |
|
2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye) |
500 μL |
1 mL×2 |
-20℃ |
a)Lysis Buffer 和Proteases两种组分配合使用于动物组织裂解;
b)2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye) 包含PCR扩增所需要的热启动Taq DNA聚合酶、dNTP和Mg2+等;已混有溴酚蓝染料作为电泳指示剂, PCR产物可以直接进行电泳。
运输方法:
保存方法
1. 试剂10184-A【Lysis Buffer】为动物组织裂解缓冲液,在常温下,可保存12个月。
2. 试剂10184-B【Proteases】为动物组织裂解剂,使用时请勿长久开盖,建议保存于-20℃,避免反复冻融。
3. 试剂10184-C【2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye)】,建议保存于-20℃,避免反复冻融。
操作方法
样品基因组DNA释放
1. 在离心管中加入200 μL Lysis Buffer,2 μL Proteases,轻轻涡旋混匀;
2. 取约10 mg动物组织,置于上述离心管中,轻轻涡旋混匀。
3. 55℃孵育5-30 min,然后95℃处理10 min。
4. 12000 rpm离心5 min。
5. 将上清转移至新的离心管,4℃或-20℃保存或直接用于PCR扩增。
【注】:a)Lysis Buffer与Proteases混合后尽快使用,不宜长期保存;大量样本操作时,可以将Lysis Buffer与Proteases按100 μL:1 μL的比例混匀备用。
b)组织应取少量并尽量剪碎,以便裂解反应更顺利进行;鼠尾组织可以取1-5 mm;皮肤内脏等可以取约一粒米大小碎块。
c)55℃孵育,一般5 min即可满足多数PCR需求,如鼠尾、鼠耳等组织;若需要的DNA量较大或样品较难裂解,可将时间延长至30 min或更久;组织块不需完全裂解,残余的部分在后续离心步骤中可被除去。
PCR反应鉴定——PCR反应体系
组分 |
体积(μL) |
终浓度 |
2× Tissue Direct PCR Mix(With Dye) |
10 |
1× |
Forward Primer (10 μM) |
0.5 |
0.25 μM |
Reverse Primer (10 μM) |
0.5 |
0.25 μM |
裂解产物(DNA模板) |
1 |
- |
ddH2O |
To 20 |
- |
【注】:各组分使用前应充分混匀。
a)模板使用量:建议1-10%总体系。避免超过总体系的20%。
b)引物终浓度:推荐使用0.2-0.25 μM。反应性能较差时,可在0.1-0.5 μM范围内调整引物浓度。
c)反应体系:推荐使用20 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
d)体系配制:配制好PCR反应体系,置于涡旋仪上涡旋混匀,瞬时离心将反应液集于管底。
e)对照反应:建议进行PCR时,设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。
PCR反应鉴定——PCR反应条件
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
预变性 |
94℃ |
5 min |
1 |
变性 |
94℃ |
5 sec |
35(推荐25-40 ) |
退火 |
50-65℃ |
5 sec |
|
延伸 |
72℃ |
5 sec |
|
终延伸 |
72℃ |
地 址: 上海市浦东新区天雄路166弄一号楼三层南单元 联系人: 李自转 电 话: 400-6111-883、021-34615995-8075 传 真: 021-34615995-188 Email:lizizhuan@yeasen.com
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